Современные подходы к определению пирогенов. Обеспечение апирогенности лекарственных форм
Вы будете перенаправлены на Автор24
Пирогенность – это свойство химических агентов и других веществ, которое проявляется в способности вызывать в организме реакцию лихорадки.
Свойства пирогенов и их классификация
Пирогены – это вещества, которые вызывают устойчивое повышение температуры тела при поступлении их в организм из окружающей среды или образовании непосредственно в нем.
Пирогены могут быть:
Лихорадочная реакция запускается вторичными пирогенами, которые высвобождаются при действии нейтрофилов и макрофагов.
Что касается экзогенных пирогенов, то они могут иметь инфекционную и неинфекционную природу. Это происходит потому, что они являются продуктами метаболизма бактерий (патогенных и непатогенных) и влияют непосредственно на терморегуляционный центр внутри организма. Такой пирогенный эффект называется опосредованным, поскольку он реализуется путем образования в организме вторичных пирогенов.
К самым известным и изученным пирогенам относят липополисахариды, которые выделяются из стенок грамотрицательных бактерий. Такими же способностями обладают метаболиты стероидных гормонов, двуспиральная интерфероногенная РНК, хемотоксические пептиды. Все указанные вещества оказывают эффект высвобождения из лейкоцитов вторичных пирогенных веществ. К ним относят простагландины и интерфероны.
Экзогенные пирогены – это пирогенные вещества, выделяемые микроорганизмами в процессе своей жизнедеятельности или освобождающиеся при их распаде. Пирогенной активностью обладают почти все патогенные бактерии, многие вирусы и грибки, патоггенные микроорганизмы.
Экзогенные пирогены являются для организма чужеродными агентами, поэтому они подлежат нейтрализации при помощи гранулоцитов и клеткок иммунной памяти. Они вступают во взаимодействие с пирогенами и высвобождают из лейкоцитов вторичные пирогенные вещества.
Готовые работы на аналогичную тему
В дальнейшем лейкоцитарные пирогены воздействуют на центральную нервную систему и тормозные интернейроны, которые расположены в передней области гипоталамуса на мембранах со специфическими рецепторами. Такие рецепторы взаимодействуют с пирогенами и активируют аденилатциклазную систему, тем самым повышая содержание в клетках цАМФ (цикличного адензинмонофосфата). Это вещество меняет чувствительность терморегуляционного центра в отношении холодовых и тепловых сигналов.
Апирогенность лекарственных форм
Одним из наиболее важных требований, которые предъявляются к качеству лекарственных средств, является апирогенность.
Медицинские растворы, которые предназначены для внутривенного введения могут вызвать лихорадочную реакцию, если в них имеются убитые бактерии и продукты их распада. Чтобы избежать подобной ситуации, в дистиллированной воде, которая используется для инъекций, число бактерий в 1 мл не должно превышать 10-20 шт.
Готовые формы лекарственных препаратов, которые предназначены для парентерального введения помимо контроля на стерильность подвергаются к проверке на пирогенность, чтобы избежать возникновения тяжелого лихорадочного состояния.
Обеспечение апирогенности лекарственных форм
Пирогенная реакция может иметь различную степень выраженности, поэтому ее влияние на состояние здоровья может быть незначительным или критическим, вызывающим летальный исход. В связи с этим фармацевтическая и медицинская науки вырабатывают целый ряд методов, которые блокируют пирогенность лекарственных препаратов.
Что касается метода контроля на кроликах, то он официально разрешен и применяется с начала сороковых годов двадцатого века. Он обеспечивает систему безопасности в отношении пирогенности многочисленных лекарственных препаратов. Но у этого метода имеются ограничения и отрицательные стороны. Он может применяться только как разрешающий и запрещающий тест, поскольку имеет качественный характер.
Кроме того, его результаты находятся в существенной зависимости от индивидуальных особенностей конкретного организма, его ситуативного состояния на момент тестирования. Также этот метод не дает возможности проверять некоторые группы лекарственных средств. В них входят, например, седативные препараты.
Наиболее распространенные методики ЛАЛ-теста: гель-тромб тест; кинетико-турбидиметрический количественный метод; хромогенный метод; колориметрический метод. Таким образом, можно сделать вывод о том, что исследования пирогенности лекарственных препаратов сегодня вышли на новый уровень, стали более качественными, обоснованными с количественной точки зрения и безопасными для исследователя. Проверка пирогенности лекарственных средств входит в обязательную систему проверки препаратов, принятую в современной фармацевтической промышленности.
Апирогенность как одно из основных требований к качеству парентеральных лекарственных форм. Пирогенные вещества. Способы депирогенизаци
Автор работы: Пользователь скрыл имя, 03 Февраля 2014 в 21:35, курсовая работа
Краткое описание
Цель моей курсовой работы заключается в том, чтобы показать, что одним из основных требований к качеству парентеральных лекарственных форм является апирогенность. Пирогенные вещества – это продукты жизнедеятельности и распада микроорганизмов, погибшие микробные клетки. Присутствие этих веществ в инъекционных растворах может вызвать у больного при введении в сосуды, спинномозговой канал пирогенную реакцию – повышение температуры тела, озноб и другие болезненные реакции, а высокое содержание их может привести к летальному исходу.
Содержание
Введение……………………………………………………………………. 3
Цели и задачи работы………………………………………………………5
Обзор литературы:
I. Пирогенные вещества………………………………………………..6
II. Источники и природа пирогенных веществ:
1. Эндогенные пирогенные вещества………………………………7
2. Экзогенные пирогенные вещества………………………………8
III. Пирогенал……………………………………………………………10
IV. Лихорадка……………………………………………………………12
V. Пирогенная реакция…………………………………………………13
VI. Предотвращение пирогенности лекарственных препаратов (способы депирогенизации)…………………………………………14
VII. Получение апирогенной дистиллированной воды для инъекций..17
VIII. Хранение воды для инъекций……………………………………….25
IX. Методы определения пирогенных веществ в лекарственных средствах:
1. Биологический метод (испытание на кроликах)………………..27
2. Лимулус-тест (LaL-тест)…………………………………………..29
3. Труднодоступные и малоиспользуемые методы определения пирогенных веществ в лекарственных средствах………………31
Заключение…………………………………………………………………. 33
Список использованной литературы………………………………………34
Вложенные файлы: 1 файл
ТЛФ.doc
Министерство здравоохранения и социального развития РФ
ГОУ ВПО Самарский Государственный медицинский университет
кафедра фармацевтической технологии
Курсовая работа на тему:
Апирогенность как одно из основных требований к качеству парентеральных лекарственных форм. Пирогенные вещества. Способы депирогенизации.
Манова Мария Александровна
Список использованной литературы………………………………………34
В номенклатуре современных лекарственных препаратов инъекционные лекарственные формы занимают особое место. В организм их вводят при помощи шприца с нарушением целостности кожных покровов или слизистых оболочек.
Растворы для инъекций – это особая группа лекарственных форм, изготовляемых в условиях асептики с последующей стерилизацией.
Асептика – это определенный режим работы, комплекс организационных мероприятий, позволяющий свести к минимуму возможность попадания микроорганизмов в лекарственные препараты на всех этапах технологического процесса. Для обеспечения асептики необходимо учитывать источники микробной контаминации лекарственных препаратов. К ним относятся помещения, воздух, вспомогательные и упаковочные материалы, лекарственные вещества, а также работающий персонал. Создание асептических условий достигается изготовлением лекарственных препаратов в специально оборудованном асептическом блоке, комнате, изолированной от других помещений аптеки, или в настольном боксе с использованием стерильных вспомогательных материалов и посуды.
К инъекционным и инфузионным растворам предъявляется ряд требований: отсутствие механических включений (прозрачность), стабильность, стерильность, апирогенность и специальные требования (осмолярность, соответствующий ионный состав, значение рН, изовязкость и др.).
Апирогенность инъекционных растворов обеспечивают точным соблюдением правил получения и хранения апирогенной воды (Aqua pro injectionibus) и условий изготовления инъекционных растворов.
Требование апирогенности в первую очередь относится к инфузионным растворам, а также к инъекционным при объеме одноразового введения 10 мл и более.
Качество растворов для инъекций во многом зависит от чистоты воды, используемой для их приготовле ния. Количество микроорганизмов и посторонних веществ в воде, превышающие допустимые нормы, установленные Государственной фармакопеей IX издания и нормативами, разработанными ЦАНИИ, вызывает появление пирогенных свойств у растворов. Пирогенные свойства обусловливаются пирогенными веществами, которые являются продуктами обмена и распада микроорганизмов и относятся к соединениям типа комплексных белков, полисахаридов или липополисахаридов. Растворы для инъекций, обладающие пирогенными свойствами, могут вызывать у больных при введении повышение температуры, озноб и другие болезненные реакции, а при высоком содержании пирогенных веществ даже приводить к летальному исходу.
В связи с этим Государственная фармакопея IX издания требует, чтобы пирогенные вещества отсутствовали в воде для инъекций и растворах лекарственных веществ для инъекций, а другие посторонние вещества не превышали допустимые нормы.
Цели и задачи работы
Цель моей курсовой работы заключается в том, чтобы показать, что одним из основных требований к качеству парентеральных лекарственных форм является апирогенность. Пирогенные вещества – это продукты жизнедеятельности и распада микроорганизмов (главным образом, грамотрицательных), погибшие микробные клетки. Присутствие этих веществ в инъекционных растворах может вызвать у больного при введении в сосуды, спинномозговой канал пирогенную реакцию – повышение температуры тела, озноб и другие болезненные реакции, а высокое содержание их может привести к летальному исходу.
Пирогенные вещества термостабильны и сохраняют пирогенные свойства после стерилизации растворов, проходят через многие фильтры, и освободить от них воду, инъекционные растворы путем термической стерилизации практически невозможно. Поэтому очень важна профилактика образования пирогенных веществ, которая достигается: созданием асептических условий изготовления, строгим соблюдением правил санитарного режима и поведения персонала в асептическом блоке; депирогенизацией трубопроводов, посуды, соединительных трубок. Следовательно, очень важно строго соблюдать данные требования на практике при изготовлении парентеральных лекарственных форм.
Пирогенные вещества (греч. pyr – огонь +gennao – создавать, производить) – биологически активные вещества экзогенного (бактериального и вирусного) и эндогенного (клеточно-тканевого) происхождения, обладающие свойством вызывать перестройку уровня регуляции температурного гомеостаза, приводящую к повышению температуры тела и развитию лихорадки.
Пирогенные вещества относятся к соединениям типа липополисахаридов – веществ с большой молекулярной массой, достигающей 8 000 000 и размером частиц 0,05- 1 мкм. Активным пирогеном в липополисахаридах является липидная часть, которая действует на терморегуляторные центры гипоталамуса и вызывает функциональные нарушения в органах и системах организма. Присутствие этих веществ в инъекционных растворах может вызвать у больного при введении в сосуды, спинномозговой канал пирогенную реакцию – повышение температуры тела, озноб и другие болезненные реакции, а высокое содержание их может привести к летальному исходу. Наиболее резкие пирогенные реакции наблюдаются при внутрисосудистых, спинномозговых и внутричерепных инъекциях.
Первоначально это явление было описано в 1865 г. при парентеральном введении дистиллированной воды. В 1876 г. впервые появился термин «пироген» применительно к веществам, выделенным из гниющего мяса. В 1891 г. С. П. Боткин установил, что одной из причин лихорадочной реакции при брюшном тифе является образование тканевых пирогенов. В период 1892 – 1912 г. г. было установлено, что пирогенная реакция вызывается как живыми, так и погибшими микроорганизмами. В 1923 г. F. B. Seibert выделил пирогенные вещества из растворов, установил их термостабильность и первым обосновал использование кроликов для изучения пирогенной реакции.
Источники и природа пирогенных веществ
Различают эндогенные и экзогенные пирогены. Первые являются клеточно- тканевыми продуктами, образующимися в определенных условиях. Вторые – это вещества, содержащиеся в микробах и выделяющиеся в процессе их жизнедеятельности.
Эндогенные пирогенные вещества
Эндогенные пирогенные вещества образуются в организме при действии бактериальных пирогенных веществ и экзогенных факторов, вызывающих воспаление, а также при иммунопатологических процессах с участием лимфокинов. Основным источником эндогенных пирогенных веществ являются моноциты крови, альвеолярные и перитонеальные макрофаги, фиксированные макрофаги селезенки и печени, а также нейтрофильные гранулоциты и эозинофилы; они спонтанно синтезируются клетками некоторых опухолей. Образование эндогенных пирогенных веществ лейкоцитами осуществляется только в условиях патологии при взаимодействии с различными раздражителями и протекает в две фазы: фаза активизации и фаза освобождения пирогенна. Вырабатываемый лейкоцитами пирогенного вещества (лейкоцитарный пироген) термолабильный белок с молекулярной массой 10 000 – 45 000 обладает в очищенном виде высокой пирогенной активностью; стимулирует лейкоцитопоэз, синтез иммуноглобулинов и белков (фибриногена, гаптоглобулина, церулоплазмина, C-реактивного белка). В острой фазе воспаления лейкоцитарный пироген не имеет видовой пирогенной специфичности. Открытие эндогенных пирогенных веществ позволило обосновать современную унитарную теорию лихорадки. Они играют роль белковых медиаторов; их действие на гипоталамические центры терморегуляции через простагландины и циклические нуклеотиды приводит к смещению уровня регуляции температуры, включению аппарата физической и химической терморегуляции, к развитию лихорадки.
Экзогенные пирогенные вещества
Экзогенные пирогенные вещества не действуют непосредственно на центры терморегуляции; их пирогенная активность опосредуется через образование вторичных, эндогенных, пирогенных веществ в организме. Такой способностью обладают также метаболиты стероидных гормонов, синтетические хемотоксические пептиды и интерфероногенная двуспиральная РНК. Наиболее высокой биологической активностью обладают липополисахариды грамотрицательных бактерий, способные повышать температуру тела, стимулировать гипофиз-адреналовую систему, лейкоцитопоэз, синтез иммуноглобулинов, образование и выделение лейкоцитами вторичных пирогенных веществ, интерферона, простагландинов, тормозить рубцово-спаечные процессы и др.
Носителем пирогенности является эндотоксин (0-антиген), присутствующий в клеточной оболочке микроорганизмов и составляющий от 1 до 5 % сухой массы бактериальных клеток. Эндотоксин представляет собой липополисахаридо-протеино- липоидный комплекс.
При его гидролизе образуются не обладающие пирогенностью сложный протеин и липид В, а также относительно устойчивый липополисахарид, ответственные за пирогенную реакцию.
Липополисахаридный комплекс является компонентом самой внешней зоны клеточной стенки грамотрицательных бактерий. При кислотном гидролизе липопо лисахарид расщепляется на свободный липид А и «деградированный» нетоксичный фосфорилированный полисахарид. Липид А липополисахаридов различных микроорганизмов имеет очень близкое строение, в то время как полисахаридная часть весьма отличается как своей молекулярной массой, так и природой моносахаридов. Считают, что пирогенность и токсичность пирогенов определяется именно липидом А, полисахарид же биологически неактивен и обеспечивает растворимость липополисахаридного комплекса.
Широким варьированием свойств полисахаридов объясняют значительные колебания у пирогенов, образуемых различными микроорганизмами, молекулярной массы (от 10 000 до 8 000 000), размеров частиц (от 50 мкм до 1 мкм) и минимальной дозы, вызывающей пирогенную реакцию (от 0,001 до 7 мкг/мл).
К экзогенным пирогенным веществам относится препарат пирогенал. Пирогенал – биогенный препарат; липополисахаридный комплекс из клеточных оболочек грамотрицательных бактерий.
Светло-кремовый аморфный порошок, легко растворимый в воде. Активность препарата определяют биологическим путем и выражают в минимальных пирогенных дозах (МПД). За 1 МПД принимают количество препарата, которое при внутривенном введении вызывает повышение температуры тела кроликов на 0,6 град. МДП стандартного пирогенала – 0,01 мкг/кг.
Пирогенал вызывает повышение температуры тела путем активации ретикулоэндотелиальной и гипоталамо-гипофизарной систем. Стимулирует общую и специфическую резистентность организма, а также обладает адъювантными, десенсибилизирующими и противовоспалительными свойствами. В механизме действия пирогенала имеет значение его фиксация на лейкоцитах и мастоцитах с последующим высвобождением лизосомальных ферментов, лейкоцитарного (эндогенного) пирогенна, биогенных аминов и других биологически активных веществ.
Испытания на пирогенность. Когда они нужны? Отличия процедуры национальной и ЕАЭС
В последнее время часто возникает вопрос – проводить ли в отношении того или иного медицинского изделия испытания на пирогенность в случае, если оно не контактирует с прямым кровотоком, но при этом является имплантируемым. Существуют разные мнения на этот счет. Например, в последнее время периодически встречаются замечания такого характера:
«Сведения об апирогенности медицинского изделия, указанные в технической, эксплуатационной документации и надпись «Апирогенно» на макете маркировки противоречат назначению по применению, виду контакта медицинского изделия и не соответствуют требованиям пункта 5.5.2 ГОСТ Р 52770-2016 (изделие не контактирует с циркулирующей кровью). Проведение исследований по показателю пирогенность в соответствии с требованиями ГФ РФ Издание XIV. ОФС. 1.2.4.0005.15 неправомерно.»
Сопоставим требования к тому, какие изделия подлежат исследованиям на пирогенность из разных нормативных документов:
Как можно заметить, в рамках процедуры ЕАЭС испытания на пирогенность обязательно проводятся в отношении всех имплантируемых медицинских изделий. В национальной же процедуре такое обязательство возлагается только в отношении изделий, так или иначе контактирующих с кровью.
Как же быть, если изделие вводится, например, в мягкие ткани?
Мы написали на эту тему запрос в Росздравнадзор.
И получили ответ от Росздравнадзора, подкрепленный мнением экспертной организации ФГБУ «Национальный институт качества» Росздравнадзора (бывший ФГБУ «ЦМИКЭЭ» Росздравнадзора).
Из ответа мы можем сделать следующие выводы:
Для регистрации медицинских изделий обладающих характеристикой «апирогенность» (также по процедуре ЕАЭС), вы можете обратиться к нам:
info@medrelic.ru
+7 (495) 785-72-85
Пирогенность (ОФС.1.2.4.0005.15). Методика испытания
» data-shape=»round» data-use-links data-color-scheme=»normal» data-direction=»horizontal» data-services=»messenger,vkontakte,facebook,odnoklassniki,telegram,twitter,viber,whatsapp,moimir,lj,blogger»>
Пирогенность (ОФС.1.2.4.0005.15)
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
ОФС.1.2.4.0005.15 Пирогенность
Взамен ГФ XII, ч.1, ОФС42-0061-07
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на испытание пирогенности инъекционных растворов и фармацевтических субстанций, из которых они изготавливаются. Испытание основано на измерении температуры тела у кроликов до и после инъекции.
Содержание животных и подготовка их к проведению испытания
Каждого кролика содержат в отдельной клетке на полноценном пищевом рационе, ограждая от раздражающих воздействий (акустических, оптических и других). В помещениях, где находятся животные и проводятся испытания, поддерживают постоянную температуру воздуха 20 ± 3 ºС. Перед испытанием проводят осмотр животных и отбирают здоровых кроликов одного пола, не альбиносов, с массой тела от 2,0 до 3,5 кг, которые не теряли в массе в течение предыдущей недели.
За 18 часов до испытания кроликов лишают корма без ограничения воды. Во время опыта животные не получают ни корма, ни воды. Кроликов, впервые предназначенных для опыта или не участвовавших в опыте более четырех недель, предварительно готовят к процедуре испытания, осуществляя все рабочие операции (осмотр, взвешивание, измерение температуры тела) за исключением инъекции.
Кролики, ранее бывшие в опыте, могут быть использованы повторно через трое суток, если введенное им лекарственное средство было апирогенным. При повышении температуры тела у животного на 0,6 ºС и более, кролик может быть использован для дальнейших опытов не ранее, чем через две недели.
Если испытуемое лекарственное средство обладает антигенными свойствами, то порядок повторного использования животных для испытаний указывают в фармакопейной статье.
Материалы и оборудование
Посуда для разведения, шприцы и иглы для инъекций должны быть стерильными и апирогенными, что обеспечивается нагреванием при температуре 250ºС в течение 30 минут или 200ºС в течение 60 минут.
Для разведения испытуемых лекарственных средств используют 0,9 % раствор натрия хлорида для инъекций, если в фармакопейной статье не указан другой растворитель. Все растворители должны быть стерильными и апирогенными.
Ректальную температуру у кроликов измеряют с точностью до 0,1ºС медицинским максимальным ртутным или электронным термометром с термочувствительным датчиком. Термометр или датчик вводят в прямую кишку кролика на глубину от 5 до 7,5 см в зависимости от массы тела животного.
Введение испытуемого лекарственного средства
Испытуемое лекарственное средство вводят в ушную вену кролика, если в фармакопейной статье не указан другой путь введения. Объем инъецируемого раствора должен составлять не менее 0,2 мл и не более 10 мл на 1,0 кг массы тела животного. Перед введением раствор подогревают до температуры 37,0 ± 2ºС.
Тест-дозу испытуемого лекарственного средства, объём вводимого раствора и, если необходимо, скорость введения указывают в фармакопейной статье.
Проведение испытания
Испытание лекарственного средства проводят на группе из трех кроликов с исходной температурой 38,5-39,5 ºС.
Перед опытом, с интервалом не менее 30 минут, у каждого кролика дважды измеряют температуру тела. Различия в показаниях температуры у одного и того же животного не должны превышать 0,2ºС. В противном случае кролика исключают из испытания. За исходную температуру принимают величину последнего результата измерения.
Раствор испытуемого лекарственного средства вводят животным сразу после второго измерения температуры.
Измерения температуры после внутривенного введения испытуемого лекарственного средства проводят с интервалом не более 30 минут на протяжении трех часов. При других путях парентерального введения – на протяжении пяти часов.
Учет результатов
Испытание лекарственного средства можно проводить поэтапно. На каждом этапе используют трех кроликов. Максимальное число этапов не должно превышать четырех.
По окончании каждого из этапов испытания определяют максимальное изменение температуры (Δt) тела каждого кролика по сравнению с исходным значением. Изменение температуры тела животного ниже исходной величины принимают за нулевое и не учитывают.
Для трех кроликов определяют сумму индивидуальных максимальных повышений температур (∑ Δt). Значения ∑ Δt, полученные на разных этапах испытания, последовательно суммируют, а результаты сравнивают с уровнями, указанными в Таблице 1.
После первого этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 1,2 ºС (Таблица 1, колонка 3), а индивидуальное повышение температуры ни у одного из трех кроликов не превышает 0,5 ºС (колонка 4).
Если результат, полученный на первом этапе, превышает 1,2 ºС (колонка 5) или зарегистрировано индивидуальное повышение температуры более чем на 0,5 ºС хотя бы у одного из трех кроликов (колонка 6), то необходимо перейти к проведению следующего этапа испытания.
После второго этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 2,8ºС (колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС отмечено не более, чем у одного из шести кроликов (колонка 4).
Если результат, полученный на втором этапе испытания, больше 2,8ºС, но меньше 4,3ºС (колонка 5), или более, чем у одного животного зарегистрировано индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС (колонка 6), то необходимо перейти к проведению следующего этапа испытания.
После третьего этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 4,5ºС (колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС отмечено не более, чем у двух из девяти кроликов (колонка 4).
Если результат, полученный на третьем этапе испытания, больше 4,5ºС, но меньше 6,0ºС (колонка 5), или зарегистрировано индивидуальное повышение температуры свыше 0,5 ºС более, чем у двух животных (колонка 6), то необходимо перейти к проведению следующего этапа испытания.
После четвертого этапа испытания лекарственное средство признают апирогенным, если полученный результат меньше или равен 6,6 ºС (колонка 3), а индивидуальное повышение температуры свыше 0,5 ºС отмечено не более, чем у трех из двенадцати кроликов (колонка 4).
Лекарственное средство признают пирогенным, если результат на втором или последующих этапах испытания выше, чем величины, указанные в колонке 7. Лекарственное средство признают пирогенным и в том случае, если в результате четырех этапов испытания зарегистрировано индивидуальное повышение температуры свыше 0,5ºС более, чем у трех кроликов из двенадцати.
Таблица 1. Оценка результатов испытания
* При индивидуальном повышении температуры свыше 0,5 о С более, чем у трех кроликов из двенадцати, лекарственное средство признают пирогенным.
